Optimización del análisis de polimorﬁsmos conformacionales de cadena simple. Caso gen del receptor de hormona Luteinizante bovino - Belkys J. Vásquez M.; Oscar De La Rosa; Alexis F. Márques U.; Geomar Seijas Pedroza; José A. Aranguren Méndez (Zootecnia Tropical, 2014)
Con el objeto de optimizar el análisis de polimorﬁsmos conformacionales de cadena simple (SSCP) para la detección y genotipado de los polimorﬁsmos nucleotídicos simples (SNP) presentes en una región del gen receptor de hormona Luteinizante (LHR) bovino, se realizó un experimento en dos fases. En la primera se realizó un tamizaje molecular de 173 individuos mediante un análisis SSCP exploratorio. Las muestras que presentaron patrones electroforéticos diferenciales fueron secuenciadas y aquellas con variaciones nucleotídicas identiﬁcadas fueron utilizadas en la segunda fase para la optimización de la metodología SSCP. Se evaluaron las condiciones de la electroforesis variando la relación acrilamida/ bis-acrilamida, porcentaje de la mezcla, intensidad de corriente, porcentaje de glicerol y duración de la electroforesis. Los geles fueron teñidos en una solución de SYBER®safe, 0,7 %, durante 25 minutos en agitación suave y los patrones electroforéticos fueron visualizados mediante un transiluminador UV. La optimización de la técnica fue asumida basada en la separación, nitidez y perceptibilidad de las bandas, así como la detección de las mutaciones. Se consideró como optimizado el sistema electroforético I. Se conﬁrmó la presencia del SNP rs41256848, además de la detección de una variante ubicada en la posición 1337 de la secuencia de referencia NM_174381.1. En esta investigación se optimizó un procedimiento práctico para la detección y genotipado de los polimorﬁ smos presentes en el fragmento de LHR bovino estudiado.